异体脱细胞真皮修复烧伤后瘢痕20例

发布时间：[2014-05-27]

 

 人民军医2007年第50卷第2期(总第567期)
 
异体脱细胞真皮修复烧伤后瘢痕20例
 
200433 上海第二军医大学第一附属医院 
徐 豫 王光毅 肖仕初 马 兵 卫 伟 夏照帆
 
关键词：成纤维细胞；脱细胞真皮；烧伤；瘢痕
 
大面积或深度烧伤伤员康复期，皮肤瘢痕的修复是其主要问题。随着组织工程技术的发展，体外构建的永久性皮肤替代物已广泛用于烧伤创面封闭和瘢痕修复。2003年1月～2005年12月，我们在体外条件下将异体成纤维细胞种植于异体脱细胞真皮(aeellular dermal matrix ADM)表面，对其进行仿生修饰后修复烧伤瘢痕2O例。现报告如下。
l 临床资料
1.1 一般情况 2O例中，男14例，女6例；年龄25~40(31.5±8.3)岁，均为肢体或躯干非关节部位烧伤、创面瘢痕愈合1年以上，瘢痕局部无破溃。设自身对照，移植仿生修饰异体脱细胞真皮为观察组，单纯移植自体中厚皮片为对照组。观察组材料为脱细胞真皮(J-1型脱细胞异体真皮，由北京桀亚莱福生物技术有限责任公司生产)，成纤维细胞取自健康成年男性包皮。供者均接受乙型肝炎病毒、HIV (艾滋病病毒)及梅毒螺旋体等病原免疫学排查。
1.2 方法
1.2.1 体外成纤维细胞和脱细胞真皮培养,取健康成人环切包皮，去除皮下组织，剪成小块状，置于0.5% Dispase溶液中，保持4℃消化12h。去除表皮层，将分离的真皮组织剪碎后置于0.1% 胶原酶I中，热消化2 h，吹打成细胞悬液后过滤，4℃离心5min(1500r/min)。按照5×105/cm2。加入T75培养瓶，置于培养箱(37℃，5% CO2)培养。以含1O％小牛血清的DMEM 培养液培养24 h后更换培养液。当细胞融合达8O%～9O%时，以0．25%胰蛋白酶溶液消化传代。将10 cm×10 cm 或10 cm×20 cm 的脱细胞真皮铺于相应大小的培养皿中，置于DMEM 培养液中孵育48 h，证实无污染后更换培养液。取3～5代成纤维细胞按照2×105/cm2。接种于脱细胞真皮表面，体外培养1周，备移植用。
1.2.2 手术方法 (1)观察组：手术完全切除术区瘢痕组织至皮下浅筋膜，严密止血后，将异体成纤维细胞仿生修饰的脱细胞真皮置于手术创面区域内，脱细胞真皮与创面基底紧密贴附(图1)，取自体刃厚皮覆盖于脱细胞真皮之上，以丝线将自体皮与脱细胞真皮一同缝合固定于手术切口边缘，生理盐水冲洗皮下，凡士林油纱布覆盖内层，无菌敷料加压包扎固定。(2)对照组：手术创面封闭不用脱细胞真皮，自体皮选择中厚皮片。

 1.2.3  修复质量评价  计算术前切除瘢痕平均厚度，术后平均愈合时间。术后3个月，通过手术创面收缩率，修复后局部皮肤色泽、质地，以及病人主观感觉等指标评价瘢痕组织修复效果。
1.3 结果
1.3.1  真皮培养结果   异体脱细胞真皮呈乳白色，具有一定的弹性与韧性。种植成纤维细胞后培养，物理特性无明显改变。培养2天后组织学检查示：异体脱细胞真皮表面均可见成纤维细胞。随着时间的延长，真皮表面的成纤维细胞逐渐融合成多层。培养1周后，种植的成纤维细胞与细胞外基质相互交织成团块状，呈立体结构生长，均匀地分布于异体脱细胞真皮表面及孔隙中。
1.3.2  创面愈合时间   治疗前局部瘢痕平均厚度，观察组(O.85±0.43)cm，对照组(0.86±0.41)cm，两组比较差异不显著(P>0．05)。术后创面平均愈合时间，观察组(14．1±3．4)天，对照组(12．8±4．1)天，两组比较差异不显著(P>0．05)。
1.3.3  创面愈合质量评价  术后3个月观察组和对照组创面收缩率分别为(24.2± 6.6)% 和(33.6±7.3) %，两组比较差异显著(P<0．05)。且观察组经手术修复后，局部皮肤质量在色泽、质地和主观感觉上明显优于对照组(图2)


 
2 讨论
深度烧伤和大面积烧伤伤员创面封闭后局部形成明显瘢痕，严重影响外观和功能。而且由于瘢痕局部皮肤质量差、感觉异常，也易导致局部皮肤破溃和瘙痒等。因此，烧伤康复期应对皮肤瘢痕进行修复。虽然自体游离皮片在整形外科、烧伤外科瘢痕修复中广泛应用，但由于是采用“拆东墙补西墙”的自体皮片移植方法，不仅存在供区有限的问题，而且修复瘢痕对自体皮片的厚度也有苛刻的要求。如果所取自体皮偏薄，虽供区愈合快、遗留瘢痕轻，但创面修复质量差，局部收缩严重；如果所取自体皮偏厚，则供区愈合慢、遗留瘢痕重。以往临床修复瘢痕多采用大腿外侧、侧胸壁的中厚皮片，或腹部全厚皮片。近十几年来，随着组织工程学的迅速发展，应用组织工程产品修复自体受损器官或组织，成为医务工作者关注的方法。Bell早在1983年就将新生儿真皮成纤维细胞与牛I型胶原混合制成活性真皮支架，应用于人体创面修复。此后，国内外学者在临床上广泛应用皮肤组织工程材料修复增生性瘢痕。我们通过动物实验发现，在移植异体成纤维仿生修饰的脱细胞真皮后，异体成纤维细胞在局部沉淀了较多的细胞外基质，释放了能够促进创面愈合的生长因子，增强了表皮细胞与真皮基质的黏附，因此，其脱细胞真皮具有更好的生物相容性。进一步研究发现，成纤维细胞抗原性弱，移植后不会发生早期排异，可继续生长、增殖，分泌上述细胞因子及细胞外基质成分，促进血管化，加速胶原合成。但移植后成纤维细胞远期存活、增殖情况还有待进一步证实。因此，通过在异体脱细胞真皮表面种植具有活性的人成纤维细胞，来提高脱细胞真皮的仿生特性和创面修复质量，具有一定可行性。我们发现，该方法对创面修复后自然愈合时间无明显影响，创面虽然存在一定程度收缩，但明显优于自体中厚皮片移植，考虑与真皮基质在一定程度上抑制了成纤维细胞向肌成纤维细胞转化有关。值得一提的是，该法修复的瘢痕创面愈合后，局部皮肤质量明显优于传统方法，尤其是皮肤的柔软性和病人的主观感觉更是优于单纯中厚皮片移植。如果能严格控制异体成纤维细胞和真皮来源的安全性，这种材料是安全可靠的。
 
参考文献
 
[1] 夏照帆．永久性皮肤替代物的研究进展和现状EJ]．解放军医学杂志，2003，28(5)：389-391．
[2]肖仕初，杨瑁，贲道锋，等．含活性细胞的新型创面覆盖物的研究几初步应用[J]．第二军医大学学报，2003，24(10)：112O-1123．
[3] Brychta P，Adler J，Horky D，et a1．Use of skin substitutes in treatment of large hypertropic scars due tO hum injury I-J]．Rozhl Chir，2000,79 (1)：27-32．
[4] 肖仕初，夏照帆，杨郡，等．含表皮细胞和成纤维细胞的复合皮构建及移植[J]．中华外科杂志，2oo2，40(7)：531-533．
[5] 肖仕初，夏照帆，杨瑁．成纤维细胞一无细胞真皮替代物的生物学活性及移植实验[J]．中华烧伤杂志，2001。17(3)：231-233．
 
 (收稿：2006-08-07)